Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik. İstifadə etdiyiniz brauzerin versiyasında CSS dəstəyi məhduddur. Ən yaxşı nəticələr üçün brauzerinizin daha yeni versiyasından istifadə etməyinizi (və ya Internet Explorer-də Uyğunluq Rejimini deaktiv etməyinizi) tövsiyə edirik. Bu vaxt ərzində davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı stil və ya JavaScript olmadan göstəririk.
Yaralarda mikrob böyüməsi tez-tez sağalmaya mane olan və aradan qaldırılması çətin olan biofilmlər kimi özünü göstərir. Yeni gümüş sarğılar yara infeksiyaları ilə mübarizə apardığını iddia edir, lakin onların antibiopilm effektivliyi və infeksiyadan asılı olmayan sağalma təsirləri ümumiyyətlə məlum deyil. Staphylococcus aureus və Pseudomonas aeruginosa-nın in vitro və in vivo biofilm modellərindən istifadə edərək, Ag1+ ion yaradan sarğıların effektivliyini bildiririk; etilendiamintetrasirkə turşusu və benzetonium xlorid (Ag1+/EDTA/BC) ehtiva edən Ag1+ sarğıları və yara biofilmi və onun sağalmaya təsirini mübarizə aparmaq üçün Ag1+, Ag2+ və Ag3+ ionları istehsal edən gümüş nitrat (Ag oxysalts). Ag1+ sarğıları in vitro və siçanlarda yara biofilminə minimal təsir göstərmişdir (C57BL/6j). Bunun əksinə olaraq, oksigenləşdirilmiş Ag duzları və Ag1+/EDTA/BC sarğıları biofilmlərdə in vitro canlı bakteriyaların sayını əhəmiyyətli dərəcədə azaltmış və siçan yarası biofilmlərində bakteriya və EPS komponentlərində əhəmiyyətli dərəcədə azalma nümayiş etdirmişdir. Bu sarğılar biofilmlə yoluxmuş və biofilmlə yoluxmamış yaraların sağalmasına fərqli təsir göstərmişdir, oksigenləşdirilmiş duz sarğıları isə nəzarət müalicələri və digər gümüş sarğılarla müqayisədə reepitelializasiyaya, yaranın ölçüsünə və iltihaba daha faydalı təsir göstərir. Gümüş sarğıların müxtəlif fiziki-kimyəvi xüsusiyyətləri yara biofilminə və sağalmasına fərqli təsir göstərə bilər və biofilmlə yoluxmuş yaraların müalicəsi üçün sarğı seçərkən bu nəzərə alınmalıdır.
Xroniki yaralar "normal sağalma mərhələlərindən nizamlı və vaxtında keçə bilməyən yaralar" kimi müəyyən edilir1. Xroniki yaralar xəstələr və səhiyyə sistemi üçün psixoloji, sosial və iqtisadi yük yaradır. 2017-182-ci illərdə NHS-in yaraların və əlaqəli xəstəliklərin müalicəsinə illik xərcləri 8,3 milyard funt sterlinq olaraq qiymətləndirilir. Xroniki yaralar hazırda ABŞ-da da aktual problemdir və Medicare yaralı xəstələrin müalicəsinin illik xərcini 28,1-96,8 milyard dollar3 olaraq qiymətləndirir.
İnfeksiya yaraların sağalmasının qarşısını alan əsas amildir. İnfeksiyalar tez-tez sağalmayan xroniki yaraların 78%-də mövcud olan biofilmlər şəklində özünü göstərir. Biofilmlər mikroorqanizmlər yara səthləri kimi səthlərə dönməz şəkildə yapışdıqda əmələ gəlir və hüceyrədənkənar polimer (EPS) istehsal edən icmalar yaratmaq üçün birləşə bilər. Yara biofilmi toxuma zədələnməsinə səbəb olan iltihab reaksiyasının artması ilə əlaqələndirilir ki, bu da sağalmanı gecikdirə və ya qarşısını ala bilər4. Toxuma zədələnməsinin artması qismən matrix metalloproteinazalarının, kollagenaza, elastaza və reaktiv oksigen növlərinin aktivliyinin artması ilə əlaqəli ola bilər5. Bundan əlavə, iltihab hüceyrələri və biofilmlər özləri oksigenin yüksək istehlakçılarıdır və buna görə də yerli toxuma hipoksiyasına səbəb ola bilər, toxumaların effektiv bərpası üçün lazım olan həyati oksigeni tükəndirir6.
Yetkin biofilmlər antimikrob maddələrə qarşı yüksək dərəcədə davamlıdır və biofilm infeksiyalarını nəzarətdə saxlamaq üçün aqressiv strategiyalar, məsələn, mexaniki müalicə və ardınca effektiv antimikrob müalicəsi tələb olunur. Biofilmlər sürətlə bərpa oluna bildiyindən, effektiv antimikrob maddələr cərrahi debridmandan sonra yenidən əmələ gəlmə riskini azalda bilər7.
Gümüş getdikcə antimikrob sarğılarında istifadə olunur və tez-tez xroniki yoluxmuş yaralar üçün birinci dərəcəli müalicə kimi istifadə olunur. Hər biri fərqli gümüş tərkibi, konsentrasiyası və əsas matrisi olan bir çox ticari olaraq mövcud olan gümüş sarğıları mövcuddur. Gümüş qolbaqlarındakı irəliləyişlər yeni gümüş qolbaqlarının inkişafına səbəb olmuşdur. Gümüşün metal forması (Ag0) inertdir; Antimikrob effektivliyinə nail olmaq üçün ion gümüşü (Ag1+) əmələ gətirmək üçün elektron itirməlidir. Ənənəvi gümüş sarğıları mayeyə məruz qaldıqda Ag1+ ionlarını əmələ gətirmək üçün parçalanan gümüş birləşmələri və ya metal gümüşü ehtiva edir. Bu Ag1+ ionları bakteriya hüceyrəsi ilə reaksiyaya girərək struktur komponentlərindən elektronları və ya yaşamaq üçün zəruri olan kritik prosesləri aradan qaldırır. Patentləşdirilmiş texnologiya yara sarğılarına daxil olan yeni bir gümüş birləşməsinin, Ag oksisaltlarının (gümüş nitrat, Ag7NO11) inkişafına səbəb olmuşdur. Ənənəvi gümüşdən fərqli olaraq, oksigen tərkibli duzların parçalanması daha yüksək valentli gümüş halları (Ag1+, Ag2+ və Ag3+) əmələ gətirir. In vitro tədqiqatlar göstərib ki, oksigenləşdirilmiş gümüş duzlarının aşağı konsentrasiyaları Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus və Escherichia coli8,9 kimi patogen bakteriyalara qarşı tək ionlu gümüşdən (Ag1+) daha təsirli olur. Başqa bir yeni gümüş sarğı növünə biofilm EPS-ni hədəf aldığı və bununla da gümüşün biofilmə nüfuz etməsini artırdığı bildirilən əlavə maddələr, yəni etilendiamintetrasirkə turşusu (EDTA) və benzetonium xlorid (BC) daxildir. Bu yeni gümüş texnologiyaları yara biofilmlərini hədəf almaq üçün yeni yollar təklif edir. Lakin, bu antimikrobların yara mühitinə və infeksiyadan asılı olmayan sağalmaya təsiri, əlverişsiz yara mühiti yaratmamalarını və ya sağalmanı gecikdirməmələrini təmin etmək üçün vacibdir. Bir neçə gümüş sarğı ilə in vitro gümüşün sitotoksikliyi ilə bağlı narahatlıqlar bildirilib10,11. Lakin, in vitro sitotoksiklik hələ in vivo toksikliyə çevrilməyib və bir neçə Ag1+ sarğısı yaxşı təhlükəsizlik profili nümayiş etdirib12.
Burada, in vitro və in vivo şəraitində yara biofilminə qarşı yeni gümüş formulaları olan karboksimetilsellüloza sarğılarının effektivliyini araşdırdıq. Bundan əlavə, bu sarğıların infeksiyadan asılı olmayaraq immun reaksiyalarına və sağalmasına təsiri qiymətləndirildi.
İstifadə olunan bütün sarğılar kommersiya məqsədləri üçün mövcud idi. 3M Kerracel Gel Lifli Sarğı (3M, Knutsford, Böyük Britaniya) bu tədqiqatda nəzarət sarğısı kimi istifadə edilən qeyri-mikrob 100% karboksimetilsellüloza (CMC) gel lifli sarğıdır. Üç antimikrob CMC gümüş sarğısı, yəni daha yüksək valentli gümüş ionlarında (Ag1+, Ag2+ və Ag3+) 1,7 çəki% oksigenləşdirilmiş gümüş duzu (Ag7NO11) ehtiva edən 3M Kerracel Ag sarğısı (3M, Knutsford, Böyük Britaniya) qiymətləndirildi. Ag7NO11-in parçalanması zamanı Ag1+, Ag2+ və Ag3+ ionları 1:2:4 nisbətində əmələ gəlir. 1,2% gümüş xlorid (Ag1+) tərkibli Aquacel Ag Extra sarğısı (ConvaTec, Deeside, Böyük Britaniya) 13 və 1,2% gümüş xlorid (Ag1+), EDTA və benzetonium xlorid (ConvaTec, Deeside, Böyük Britaniya) 14 tərkibli Aquacel Ag + Extra sarğısı.
Bu tədqiqatda istifadə edilən ştammlar Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (İngiltərə İctimai Səhiyyəsi, Solsberi) və Staphylococcus aureus NCTC 6571 (İngiltərə İctimai Səhiyyəsi, Solsberi) idi.
Bakteriyalar gecə ərzində Muller-Hinton bulyonunda (Oxoid, Altrincham, Böyük Britaniya) yetişdirildi. Gecə ərzində kultura daha sonra Mueller-Hinton bulyonunda 1:100 nisbətində durulaşdırıldı və 200 µl steril 0,2 µm Whatman siklopor membranlarına (Whatman plc, Maidstone, Böyük Britaniya) Mueller-Hinton aqar lövhələrinə (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Böyük Britaniya) yerləşdirildi. ) 37°C-də 24 saat ərzində kolonial biofilmin əmələ gəlməsi. Bu kolonial biofilmlər loqarifmik büzülmə üçün sınaqdan keçirildi.
Sousu 3 sm2 kvadrat hissələrə bölün və steril deionlaşdırılmış su ilə əvvəlcədən nəmləndirin. Sarğı koloniyanın biofilminin üzərinə aqar lövhəsində qoyun. Hər 24 hektar biofilm çıxarıldı və biofilmdəki canlı bakteriyalar (CFU/ml) Gündüz Bucağı neytrallaşdırma bulyonunda (Merck-Millipore) ardıcıl seyreltmə (10−1 - 10−7) ilə ölçüldü. 37°C-də 24 saat inkubasiyadan sonra Mueller-Hinton aqar lövhələrində standart lövhə saymaları aparıldı. Hər bir müalicə və zaman nöqtəsi üçqat nüsxədə aparıldı və lövhə saymaları hər seyreltmə üçün təkrarlandı.
Donuz qarın dərisi, Avropa Birliyinin ixrac standartlarına uyğun olaraq, dişi Böyük Ağ donuzlardan kəsimdən 15 dəqiqə sonra əldə edilir. Dəri qırxılıb spirt salfetləri ilə təmizlənir, sonra dərini cansız hala gətirmək üçün -80°C-də 24 saat dondurulur. Əridildikdən sonra 1 sm2 dəri parçaları üç dəfə PBS, 0,6% natrium hipoxlorit və 70% etanol ilə hər dəfə 20 dəqiqə yuyulur. Epidermisi çıxarmazdan əvvəl, qalan etanol steril PBS-də 3 dəfə yuyularaq çıxarılır. Dəri, üstündə 0,45 μm qalınlığında neylon membran (Merck-Millipore) və 10% Dulbecco's modifikasiya edilmiş Eagle. Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium – Aldrich Ltd.) ilə tamamlanmış 3 ml döl mal-qara serumu (Sigma) olan 3 uducu yastıq (Merck-Millipore) olan 6 dəlikli boşqabda becərilir.
Kolonial biofilmlər biofilmə məruz qalma tədqiqatları üçün təsvir edildiyi kimi yetişdirildi. Biofilm membran üzərində 72 saat becərildikdən sonra, biofilm steril peyvənd ilgəyi istifadə edərək dəri səthinə tətbiq edildi və membran çıxarıldı. Daha sonra biofilmin yetkinləşməsi və donuz dərisinə yapışması üçün biofilm donuzun dermisində əlavə 24 saat 37°C-də inkubasiya edildi. Biofilm yetişib yapışdırıldıqdan sonra, steril distillə edilmiş su ilə əvvəlcədən nəmləndirilmiş 1,5 sm2 sarğı birbaşa dəri səthinə tətbiq edildi və 37°C-də 24 saat inkubasiya edildi. Canlı bakteriyalar PrestoBlue hüceyrə canlılıq reagentini (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, Böyük Britaniya) hər bir eksplantın apikal səthinə bərabər şəkildə tətbiq etməklə və 5 dəqiqə inkubasiya etməklə boyama yolu ilə vizuallaşdırıldı. Leica MZ8 mikroskopunda şəkilləri dərhal çəkmək üçün Leica DFC425 rəqəmsal kamerasından istifadə edin. Çəhrayı rəngə boyanmış sahələr Image Pro proqram təminatının 10-cu versiyası (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com)) istifadə edilərək kəmiyyətləndirilmişdir. Skan edən elektron mikroskopiyası aşağıda təsvir edildiyi kimi aparılmışdır.
Gecə ərzində yetişdirilən bakteriyalar Mueller-Hinton bulyonunda 1:100 nisbətində durulaşdırıldı. Steril 0,2 μm Whatman siklopor membranına (Whatman, Maidstone, Böyük Britaniya) 200 μl kultura əlavə edildi və Mueller-Hinton aqarına örtüldü. Yetkin biofilm əmələ gəlməsi üçün biofilm lövhələri 37°C-də 72 saat inkubasiya edildi.
Biofilmin 3 günlük yetişməsindən sonra, birbaşa biofilmin üzərinə 3 sm2 kvadrat sarğı qoyuldu və 24 saat ərzində 37°C-də inkubasiya edildi. Sarğı biofilmin səthindən çıxarıldıqdan sonra, hər biofilmin səthinə 20 saniyə ərzində 1 ml PrestoBlue Cell Viability Reagent (Invitrogen, Waltham, MA) əlavə edildi. Rəng dəyişiklikləri Nikon D2300 rəqəmsal kamerası (Nikon UK Ltd., Kingston, Böyük Britaniya) ilə qeydə alınmazdan əvvəl səthlər quruduldu.
Gecəlik kulturaları Mueller-Hinton aqarında hazırlayın, fərdi koloniyaları 10 ml Mueller-Hinton bulyonuna köçürün və 37°C (100 dövr/dəq) temperaturda çalkalayıcıda inkubasiya edin. Gecəlik inkubasiyadan sonra kultura Mueller-Hinton bulyonunda 1:100 nisbətində durulaşdırıldı və Mueller-Hinton aqarında 0,2 µm dairəvi Whatman siklopor membranına (Whatman International, Maidstone, Böyük Britaniya) 300 µl ləkələndi və 72 saat ərzində 37°C-də inkubasiya edildi. Yetkin biofilm aşağıda təsvir edildiyi kimi yaraya tətbiq edildi.
Heyvanlarla bağlı bütün işlər Mançester Universitetində Heyvanların Rifahı və Etik Baxış İdarəsi (P8721BD27) tərəfindən təsdiq edilmiş layihə lisenziyası və Daxili İşlər Nazirliyi tərəfindən 2012-ci ildə yenidən işlənmiş ASPA çərçivəsində dərc edilmiş təlimatlara uyğun olaraq həyata keçirilmişdir. Bütün müəlliflər gəliş qaydalarına riayət etmişdir. Bütün in vivo tədqiqatlar üçün səkkiz həftəlik C57BL/6j siçanları (Envigo, Oxon, Böyük Britaniya) istifadə edilmişdir. Siçanlar izofluranla (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, Böyük Britaniya) anesteziya edilmiş və onların dorsal səthləri qırxılmış və təmizlənmişdir. Daha sonra hər bir siçana Stiefel biopsiya şnurundan (Schuco International, Hertfordshire, Böyük Britaniya) istifadə edərək 2 × 6 mm ölçülü eksizyon yarası verilmişdir. Biofilmlə yoluxmuş yaralar üçün, zədədən dərhal sonra steril peyvənd ilgəyindən istifadə edərək yuxarıda təsvir edildiyi kimi membranda yetişdirilən 72 saatlıq kolonial biofilmi yaranın dermal təbəqəsinə tətbiq edin və membranı atın. Nəm yara mühitini qorumaq üçün bir kvadrat santimetr sarğı steril su ilə əvvəlcədən nəmləndirilir. Sarğılar hər yaraya birbaşa tətbiq edildi və əlavə yapışma təmin etmək üçün kənarlarına tətbiq olunan 3M Tegaderm filmi (3M, Bracknell, Böyük Britaniya) və Mastisol maye yapışdırıcısı (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) ilə örtüldü. Buprenorfin (Animalcare, York, Böyük Britaniya) ağrıkəsici kimi 0,1 mq/kq konsentrasiyasında tətbiq edildi. Siçanları zədədən üç gün sonra Cədvəl 1 metodundan istifadə edərək toplayın və lazım olduqda yara sahəsini çıxarın, yarıya bölün və saxlayın.
Hematoksilin (ThermoFisher Scientific) və eozin (ThermoFisher Scientific) boyanması istehsalçının protokoluna uyğun olaraq aparıldı. Yara sahəsi və reepitelializasiya Image Pro proqram təminatının 10-cu versiyası (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD) istifadə edilərək kəmiyyətləndirildi.
Toxuma kəsikləri ksilolda (ThermoFisher Scientific, Loughborough, Böyük Britaniya) devaksinlə təmizləndi, 100–50% dərəcəli etanol ilə rehidratasiya edildi və qısa müddətə deionlaşdırılmış suya (ThermoFisher Scientific) batırıldı. İmmunohistokimya istehsalçının protokoluna uyğun olaraq VectaStain Elite ABC PK-6104 dəsti (Vector Laboratories, Burlingame, CA) istifadə edilərək aparıldı. Neytrofillərə qarşı ilkin antikorlar NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) və makrofaqlar Ms CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, Böyük Britaniya) bloklayıcı məhlulda 1:100 nisbətində durulaşdırıldı və kəsilmiş səthə əlavə edildi, ardınca 2 antikor Anti-, VectaStain ABC və Vector Nova Red Peroxidase (HRP) substrat dəsti (Vector Laboratories, Burlingame, CA) əlavə edildi və hematoksilinlə əks boyandı. Şəkillər Olympus BX43 mikroskopu və Olympus DP73 rəqəmsal kamerası (Olympus, Southend-on-Sea, Böyük Britaniya) istifadə edilərək əldə edilmişdir.
Dəri nümunələri 2,5% qlutaraldehid və 4% formaldehid məhlulunda 0,1 M HEPES (pH 7,4) məhlulunda 4°C-də 24 saat ərzində fiksasiya edildi. Nümunələr dərəcəli etanol istifadə edilərək susuzlaşdırıldı və Quorum K850 kritik nöqtəli qurutma maşını (Quorum Technologies Ltd, Loughton, Böyük Britaniya) istifadə edilərək CO2-də quruduldu və Quorum SC7620 mini püskürtmə/parıltı boşaltma sistemi istifadə edilərək qızıl-palladium ərintisi ilə örtüldü. Yaranın mərkəzi nöqtəsini görüntüləmək üçün nümunələr FEI Quanta 250 skanlama elektron mikroskopu (ThermoFisher Scientific) istifadə edilərək görüntüləndi.
Toto-1 yodidi (2 μM) çıxarılan siçan yara səthinə tətbiq edildi və 37 °C-də (ThermoFisher Scientific) 5 dəqiqə inkubasiya edildi və 37 °C-də (ThermoFisher Scientific) Syto-60 (10 μM) ilə işləndi. 15 dəqiqəlik Z-yığın təsvirləri Leica TCS SP8 istifadə edilərək yaradıldı.
Bioloji və texniki replika məlumatları Graphpad Prism V9 proqram təminatı (GraphPad Software, La Jolla, CA) istifadə edilərək cədvəlləşdirilərək təhlil edilmişdir. Hər bir müalicə və qeyri-mikrob nəzarət sarğısı arasındakı fərqləri yoxlamaq üçün Dunnett-in post hoc testindən istifadə edərək çoxsaylı müqayisələrlə birtərəfli dispersiya təhlili istifadə edilmişdir. p dəyəri <0.05 əhəmiyyətli hesab edilmişdir.
Gümüş gel lifli sarğıların effektivliyi ilk dəfə in vitro şəraitində Staphylococcus aureus və Pseudomonas aeruginosa biofilm koloniyalarına qarşı qiymətləndirilmişdir. Gümüş sarğılar müxtəlif gümüş formulları ehtiva edir: ənənəvi gümüş sarğılar Ag1+ ionları istehsal edir; EDTA/BC əlavə edildikdən sonra Ag1+ ionları istehsal edə bilən gümüş sarğılar, gümüş ionlarının15 antibakterial təsiri altında biofilm matrisini məhv edə və bakteriyaları gümüşə məruz qoya bilər və Ag1+, Ag2+ və Ag3+ ionları istehsal edən oksigenləşdirilmiş Ag duzları ehtiva edən sarğılar. Onun effektivliyi gel liflərindən hazırlanmış qeyri-mikrob əleyhinə nəzarət sarğısı ilə müqayisə edilmişdir. Biofilmdə qalan canlı bakteriyalar 8 gün ərzində hər 24 saatdan bir qiymətləndirilmişdir (Şəkil 1). 5-ci gündə biofilm biofilmin bərpasını qiymətləndirmək üçün 3,85 × 105S. Staphylococcus aureus və ya 1,22 × 105P. aeruginosa ilə təkrar inokulyasiya edilmişdir. Qeyri-mikrob nəzarət sarğıları ilə müqayisədə, Ag1+ sarğıları 5 gün ərzində Staphylococcus aureus və Pseudomonas aeruginosa biofilmlərində bakteriyaların canlılığına minimal təsir göstərmişdir. Bunun əksinə olaraq, oksigenləşdirilmiş Ag və Ag1+ + EDTA/BC duzları olan sarğılar 5 gün ərzində biofilmdəki bakteriyaları öldürməkdə təsirli olmuşdur. 5-ci gündə plankton bakteriyaları ilə təkrar peyvənd edildikdən sonra biofilmin bərpası müşahidə edilməmişdir (Şəkil 1).
Gümüş sarğılarla müalicədən sonra Staphylococcus aureus və Pseudomonas aeruginosa biofilmlərində canlı bakteriyaların kəmiyyətləndirilməsi. Staphylococcus aureus və Pseudomonas aeruginosa biofilm koloniyaları gümüş sarğılar və ya antimikrob olmayan nəzarət sarğıları ilə müalicə edildi və qalan canlı bakteriyaların sayı hər 24 saatdan bir müəyyən edildi. 5 gündən sonra biofilm 3.85 × 105S ilə təkrar inokulyasiya edildi. Staphylococcus aureus və ya 1.22 × 105P. Biofilmin bərpasını qiymətləndirmək üçün bakterioplankton Pseudomonas aeruginosa koloniyaları fərdi olaraq formalaşdırıldı. Qrafiklər orta +/- standart xətanı göstərir.
Gümüş sarğıların biofilmin canlılığına təsirini vizuallaşdırmaq üçün donuz dərisində ex vivo yetişdirilən yetkin biofilmlərə sarğılar tətbiq edildi. 24 saatdan sonra sarğı çıxarılır və biofilm mavi reaktiv boya ilə boyanır və bu boya canlı bakteriyalar tərəfindən çəhrayı rəngə çevrilir. Nəzarət sarğıları ilə işlənmiş biofilmlər çəhrayı idi, bu da biofilmdə canlı bakteriyaların mövcudluğunu göstərir (Şəkil 2A). Bunun əksinə olaraq, Ag oxysols sarğısı ilə işlənmiş biofilm əsasən mavi idi, bu da donuz dərisinin səthindəki qalan bakteriyaların canlı olmayan bakteriyalar olduğunu göstərir (Şəkil 2B). Ag1+ tərkibli sarğılarla işlənmiş biofilmlərdə qarışıq mavi və çəhrayı rənglənmə müşahidə edildi ki, bu da biofilmdə canlı və canlı olmayan bakteriyaların mövcudluğunu göstərir (Şəkil 2C), Ag1+ tərkibli EDTA/BC sarğıları isə əsasən mavi və bəzi çəhrayı ləkələrlə idi ki, bu da gümüş sarğıdan təsirlənməmiş sahələri göstərir (Şəkil 2D). Aktiv (çəhrayı) və qeyri-aktiv (mavi) sahələrin kəmiyyətləndirilməsi göstərdi ki, nəzarət yamağı 75% aktivdir (Şəkil 2E). Ag1+ + EDTA/BC sarğıları oksigenləşdirilmiş Ag duz sarğılarına bənzər şəkildə işlədilib və sağ qalma nisbəti müvafiq olaraq 13% və 14% təşkil edib. Ag1+ sarğısı həmçinin bakteriyaların canlılığını 21% azaltdı. Bu biofilmlər daha sonra skanedici elektron mikroskopiyası (SEM) istifadə edilərək müşahidə edildi. Nəzarət sarğısı və Ag1+ sarğısı ilə müalicədən sonra donuz dərisini örtən Pseudomonas aeruginosa təbəqəsi müşahidə edildi (Şəkil 2F, H), Ag1+ sarğısı ilə müalicədən sonra isə az sayda bakteriya hüceyrəsi və az sayda bakteriya hüceyrəsi tapıldı. Kollagen lifləri donuz dərisinin toxuma quruluşu hesab edilə bilər (Şəkil 2G). Ag1+ + EDTA/BC sarğısı ilə müalicədən sonra bakteriya lövhələri və altındakı kollagen lif lövhələri görünürdü (Şəkil 2I).
Gümüş sarğı ilə müalicədən sonra Pseudomonas aeruginosa biofilminin vizuallaşdırılması. (A–D) Donuz dərisində yetişdirilən Pseudomonas aeruginosa biofilmlərində bakteriyaların canlılığı gümüş sarğılar və ya antimikrob əleyhinə nəzarət sarğıları ilə müalicədən 24 saat sonra PrestoBlue canlılıq boyası ilə vizuallaşdırıldı. Canlı bakteriyalar çəhrayı, canlı olmayan bakteriyalar və donuz dərisi mavi rəngdədir. (E) Donuz dərisində (çəhrayı ləkə) skanedici elektron mikroskopiyası istifadə edərək yetişdirilən Pseudomonas aeruginosa biofilmlərinin kəmiyyətləndirilməsi Image Pro versiya 10 (FI) və 24 saat ərzində gümüş sarğı və ya antimikrob əleyhinə nəzarət sarğısı ilə müalicə edildi. SEM şkalası zolağı = 5 µm. (J–M) Kolonial biofilmlər filtrlərdə böyüdü və gümüş sarğılarla 24 saat inkubasiyadan sonra PrestoBlue reaktiv boyası ilə boyandı.
Sarğılar və biofilmlər arasında sıx təmasın sarğıların effektivliyinə təsir edib-etmədiyini müəyyən etmək üçün düz bir səthə qoyulmuş kolonial biofilmlər 24 saat ərzində sarğılarla işlənib və sonra reaktiv boyalarla boyanıb. İşlənməmiş biofilm tünd çəhrayı rəngdə olub (Şəkil 2J). Oksigenləşdirilmiş Ag duzları olan sarğılarla işlənmiş biofilmlərdən fərqli olaraq (Şəkil 2K), Ag1+ və ya Ag1+ + EDTA/BC olan sarğılarla işlənmiş biofilmlərdə çəhrayı ləkə zolaqları müşahidə olunub (Şəkil 2L, M). Bu çəhrayı rənglənmə canlı bakteriyaların mövcudluğunu göstərir və sarğıdakı tikiş sahəsi ilə əlaqələndirilir. Bu tikilmiş sahələr biofilmdəki bakteriyaların sağ qalmasına imkan verən ölü boşluqlar yaradır.
Gümüş sarğıların in vivo effektivliyini qiymətləndirmək üçün yetkin S. aureus və P. aeruginosa biofilmləri ilə yoluxmuş siçanların tam qalınlığında kəsilmiş yaraları antimikrob olmayan nəzarət sarğıları və ya gümüş sarğılarla müalicə edildi. 3 günlük müalicədən sonra makroskopik görüntü təhlili qeyri-mikrob nəzarət sarğıları və digər gümüş sarğılarla müqayisədə oksigenləşdirilmiş duz sarğıları ilə müalicə edildikdə daha kiçik yara ölçülərini göstərdi (Şəkil 3A-H). Bu müşahidələri təsdiqləmək üçün yaralar götürüldü və Image Pro proqram təminatının 10 versiyasından istifadə edərək hematoksilin və eozinlə boyanmış toxuma kəsiklərində yara sahəsi və reepitelializasiya ölçüldü (Şəkil 3I-L).
Gümüş sarğıların yara səthinə təsiri və biofilmlərlə yoluxmuş yaraların yenidən epitelizasiyası. (A–H) Antimikrob olmayan nəzarət sarğısı, oksigenləşdirilmiş Ag duz sarğısı, Ag1+ sarğısı və Ag1+ sarğısı ilə üç günlük müalicədən sonra Pseudomonas aeruginosa (A–D) və Staphylococcus aureus (E–H) biofilmləri ilə yoluxmuş kiçik hüceyrələr. Nümunəvi makroskopik görüntülər. Ag1+ + EDTA/BC sarğısı olan siçanların yaraları. (IL) Nümunəvi Pseudomonas aeruginosa infeksiyası, yara sahəsini və epitel regenerasiyasını ölçmək üçün istifadə edilən hematoksilin və eozinlə boyanmış histoloji kəsiklər. Pseudomonas aeruginosa (M, N) və Staphylococcus aureus (O, P) biofilmləri ilə yoluxmuş yaraların yara sahəsinin (M, O) və təkrar epitelizasiya faizinin (N, P) kəmiyyətləndirilməsi (müalicə qrupu üzrə n = 12). Qrafiklər orta +/- standart xətanı göstərir. * p = < 0.05 deməkdir ** p = < 0.01 deməkdir; Makroskopik miqyas = 2.5 mm, histoloji miqyas = 500 µm.
Pseudomonas aeruginosa biofilmi ilə yoluxmuş yaralarda yara sahəsinin kəmiyyətləndirilməsi (Şəkil 3M) göstərdi ki, Ag oksisaltları ilə müalicə olunmuş yaraların orta yara ölçüsü 2,5 mm2, qeyri-mikrob nəzarət sarğısının isə orta yara ölçüsü 3,1 mm2 idi ki, bu da doğru deyil. statistik əhəmiyyətə çatdı (Şəkil 3M). p = 0,423). Ag1+ və ya Ag1+ + EDTA/BC ilə müalicə olunmuş yaralarda yara sahəsində heç bir azalma müşahidə olunmadı (müvafiq olaraq 3,1 mm2 və 3,6 mm2). Oksigenli Ag duz sarğısı ilə müalicə qeyri-mikrob nəzarət sarğısından (müvafiq olaraq 34% və 15%) və Ag1+ və ya Ag1+ + EDTA/BC-dən (10% və 11%) daha çox dərəcədə reepitelializasiyanı təşviq etdi (Şəkil 3N).
Yara sahəsi və epitel regenerasiyasında oxşar tendensiyalar S. aureus biofilmləri ilə yoluxmuş yaralarda müşahidə edilmişdir (Şəkil 3O). Oksigenli gümüş duzları olan sarğılar, nəzarət qeyri-mikrob sarğısı (2.6 mm2) ilə müqayisədə yara sahəsini (2.0 mm2) 23% azaltmışdır, baxmayaraq ki, bu azalma əhəmiyyətli deyildi (p = 0.304) (Şəkil 3O). Bundan əlavə, Ag1+ müalicə qrupundakı yara sahəsi bir qədər azalmışdır (2.4 mm2), Ag1+ + EDTA/BC sarğısı ilə müalicə olunmuş yara isə yara sahəsini azaltmamışdır (2.9 mm2). Ag-nin oksigen duzları da S. aureus biofilmi ilə yoluxmuş yaraların (31%) qeyri-mikrob əleyhinə nəzarət sarğıları ilə müalicə olunmuş yaralara nisbətən daha çox dərəcədə yenidən epitelizasiyasını təşviq etmişdir (12%, p = 0.003) (Şəkil 3P). Ag1+ sarğısı (16%, p = 0.903) və Ag+1 + EDTA/BC sarğısı (14%, p = 0.965) nəzarət qrupuna bənzər epitel regenerasiya səviyyələri göstərdi.
Gümüş sarğıların biofilm matrisinə təsirini vizuallaşdırmaq üçün Toto 1 və Syto 60 yodid boyama aparılmışdır (Şəkil 4). Toto 1 yodidi, biofilmlərin EPS-ində bol olan hüceyrəxarici nuklein turşularını dəqiq vizuallaşdırmaq üçün istifadə edilə bilən hüceyrə keçirməyən bir boyadır. Syto 60, əks boya kimi istifadə edilən hüceyrə keçirən bir boyadır16. Pseudomonas aeruginosa (Şəkil 4A-D) və Staphylococcus aureus (Şəkil 4I-L) biofilmləri ilə aşılanmış yaralarda Toto 1 və Syto 60 yodidinin müşahidələri göstərdi ki, 3 günlük sarğı müalicəsindən sonra biofilmdəki EPS əhəmiyyətli dərəcədə azalmışdır. Oksigenləşdirilmiş duzlar Ag və Ag1+ + EDTA/BC ehtiva edir. Əlavə antibiopilm komponentləri olmayan Ag1+ sarğıları Pseudomonas aeruginosa ilə aşılanmış yaralarda hüceyrəsiz DNT-ni əhəmiyyətli dərəcədə azaltmışdır, lakin Staphylococcus aureus ilə aşılanmış yaralarda daha az təsirli olmuşdur.
Kontrol və ya gümüş sarğılarla 3 günlük müalicədən sonra yara biofilminin in vivo görüntülənməsi. Hüceyrədənkənar biofilm polimerlərinin tərkib hissəsi olan hüceyrədənkənar nuklein turşularını vizuallaşdırmaq üçün Toto 1 (yaşıl) ilə boyanmış Pseudomonas aeruginosa (A–D) və Staphylococcus aureus (I–L) konfokal görüntüləri. Hüceyrədaxili nuklein turşularını rəngləmək üçün Syto 60 (qırmızı) istifadə edin. turşuları. P. Kontrol və gümüş sarğılarla 3 günlük müalicədən sonra Pseudomonas aeruginosa (E–H) və Staphylococcus aureus (M–P) biofilmləri ilə yoluxmuş yaraların skan edən elektron mikroskopiyası. SEM şkalası zolağı = 5 µm. Konfokal görüntüləmə şkalası zolağı = 50 µm.
Skaner elektron mikroskopiyası göstərdi ki, Pseudomonas aeruginosa (Şəkil 4E-H) və Staphylococcus aureus (Şəkil 4M-P) biofilm koloniyaları ilə peyvənd edilmiş siçanların bütün gümüş sarğılarla 3 günlük müalicədən sonra yaralarında xeyli az bakteriya var.
Biofilmlə yoluxmuş siçanlarda gümüş sarğıların yara iltihabına təsirini qiymətləndirmək üçün, 3 gün ərzində nəzarət və ya gümüş sarğılarla müalicə olunmuş biofilmlə yoluxmuş yaraların hissələri neytrofillər və makrofaqlar üçün spesifik antikorlar istifadə edilərək immunohistokimyəvi şəkildə boyanmışdır. Neytrofillərin və makrofaqların daxildə kəmiyyət təyini. qranulyasiya toxuması. Şəkil 5). Bütün gümüş sarğılar, üç günlük müalicədən sonra Pseudomonas aeruginosa ilə yoluxmuş yaralarda neytrofillərin və makrofaqların sayını qeyri-mikrob əleyhinə nəzarət sarğıları ilə müqayisədə azaltmışdır. Lakin, oksigenləşdirilmiş gümüş duz sarğısı ilə müalicə, sınaqdan keçirilmiş digər gümüş sarğılarla müqayisədə neytrofillərin (p = <0.0001) və makrofaqların (p = <0.0001) daha çox azalmasına səbəb olmuşdur (Şəkil 5I,J). Ag1+ + EDTA/BC yara biofilminə daha çox təsir göstərsə də, Ag1+ sarğısından daha az dərəcədə neytrofil və makrofaq səviyyələrini azaltmışdır. S. aureus biofilmi ilə yoluxmuş orta dərəcəli yaralar, nəzarət qrupu ilə müqayisədə Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) və Ag1++ EDTA/BC (p = 0.0043) oksisolları ilə sarğıdan sonra da müşahidə edilmişdir. Oxşar tendensiyalar neytropeniya üçün də müşahidə olunur. sarğı (Şəkil 5K). Lakin, yalnız oksigenləşdirilmiş Ag duz sarğısı, S. aureus biofilmləri ilə yoluxmuş yaralarda nəzarət qrupu ilə müqayisədə qranulyasiya toxumasında makrofaqların sayında əhəmiyyətli dərəcədə azalma göstərmişdir (p = 0.0339) (Şəkil 5L).
Pseudomonas aeruginosa və Staphylococcus aureus biofilmləri ilə yoluxmuş yaralarda neytrofillər və makrofaqlar, antimikrob olmayan nəzarət və ya gümüş sarğılarla 3 günlük müalicədən sonra təyin edilmişdir. Neytrofillər (AD) və makrofaqlar (EH) neytrofillər və ya makrofaqlar üçün spesifik antikorlarla boyanmış toxuma kəsiklərində təyin edilmişdir. Pseudomonas aeruginosa (I və J) və Staphylococcus aureus (K və L) biofilmləri ilə yoluxmuş yaralarda neytrofillərin (I və K) və makrofaqların (J və L) kəmiyyətləndirilməsi. Hər qrup üçün N = 12. Qrafiklər orta +/- standart xətanı, antibakterial olmayan nəzarət sarğısı ilə müqayisədə əhəmiyyət dəyərlərini göstərir, * p = < 0.05 deməkdir, ** p = < 0.01 deməkdir; *** p = < 0.001 deməkdir; p = <0.0001 göstərir).
Daha sonra gümüş sarğıların infeksiyadan asılı olmayan sağalmaya təsirini qiymətləndirdik. İnfeksiya olunmamış eksizyon yaraları 3 gün ərzində antimikrob olmayan nəzarət sarğısı və ya gümüş sarğı ilə müalicə edildi (Şəkil 6). Test edilən gümüş sarğılar arasında yalnız oksigenləşdirilmiş duz sarğısı ilə müalicə olunmuş yaralar makroskopik görüntülərdə nəzarət qrupu ilə müalicə olunmuş yaralardan daha kiçik görünürdü (Şəkil 6A-D). Histoloji analizdən istifadə edərək yara sahəsinin kəmiyyətləndirilməsi göstərdi ki, Ag oxysols sarğısı ilə müalicədən sonra orta yara sahəsi 2,35 mm2, nəzarət qrupu ilə müalicə olunmuş yaralar üçün isə 2,96 mm2 təşkil etmişdir, lakin bu fərq statistik əhəmiyyətə çatmamışdır (p = 0,488) (Şəkil 6I). Əksinə, nəzarət qrupu ilə müqayisədə Ag1+ (3,38 mm2, p = 0,757) və ya Ag1+ + EDTA/BC (4,18 mm2, p = 0,054) sarğıları ilə müalicədən sonra yara sahəsində heç bir azalma müşahidə edilməmişdir. Ag oksisol sarğısı ilə nəzarət qrupu ilə müqayisədə epitel regenerasiyasının artması müşahidə edildi (müvafiq olaraq 30% vs 22%), baxmayaraq ki, bu əhəmiyyətə çatmadı (p = 0.067), bu olduqca əhəmiyyətlidir və əvvəlki nəticələri təsdiqləyir. Oksollarla sarğı təkrar epitelizasiyanı təşviq edir. -İnfeksiya olunmamış yaraların epitelizasiyası17. Əksinə, Ag1+ və ya Ag1+ + EDTA/BC sarğıları ilə müalicə heç bir təsir göstərmədi və ya nəzarət qrupu ilə müqayisədə təkrar epitelizasiyanın azaldığını göstərdi.
Gümüş yara sarğısının infeksiyasız siçanlarda tam rezeksiya ilə yara sağalmasına təsiri. (AD) Antimikrob olmayan nəzarət sarğısı və gümüş sarğı ilə üç günlük müalicədən sonra yaraların nümunəvi makroskopik görüntüləri. (EH) Hematoksilin və eozinlə boyanmış nümunəvi yara hissələri. Yara sahəsinin kəmiyyətləndirilməsi (I) və reepitelializasiya faizi (J) yaranın orta nöqtəsindəki histoloji kəsiklərdən görüntü analizi proqramından istifadə etməklə hesablanmışdır (hər müalicə qrupu üçün n = 11–12). Qrafiklər orta +/- standart xətanı göstərir. * ortalama p = <0.05.
Gümüşün yara sağalmasında antimikrob terapiya kimi uzun müddət istifadə tarixi var, lakin bir çox fərqli formulalar və çatdırılma üsulları antimikrob effektivliyində fərqlərə səbəb ola bilər 18. Bundan əlavə, spesifik gümüş çatdırılma sistemlərinin antibioplenk xüsusiyyətləri tam başa düşülməyib. Ev sahibi immun reaksiyası planktonik bakteriyalara qarşı nisbətən təsirli olsa da, ümumiyyətlə bioplenklərə qarşı daha az təsirlidir19. Planktonik bakteriyalar makrofaqlar tərəfindən asanlıqla faqositoz olunur, lakin bioplenklər daxilində aqreqasiya olunmuş hüceyrələr immun hüceyrələrinin apoptoza məruz qalması və immun reaksiyasını gücləndirmək üçün proiltihab faktorlarını buraxması dərəcəsinə qədər ev sahibi reaksiyasını məhdudlaşdırmaqla əlavə problemlər yaradır20. Bəzi leykositlərin bioplenklərə nüfuz edə biləcəyi21, lakin bu müdafiə pozulduqdan sonra bakteriyaları faqositoz edə bilmədiyi müşahidə edilmişdir22. Yara bioplenk infeksiyasına qarşı ev sahibi immun reaksiyasını dəstəkləmək üçün holistik bir yanaşma istifadə edilməlidir. Yara təmizlənməsi bioplenki fiziki olaraq poza və bioyükün çox hissəsini aradan qaldıra bilər, lakin ev sahibi immun reaksiyası, xüsusən də ev sahibi immun reaksiyası pozulduqda, qalan bioplenklərə qarşı təsirsiz ola bilər. Beləliklə, gümüş sarğılar kimi antimikrob terapiyaları sahib orqanizmin immun reaksiyasını dəstəkləyə və biofilm infeksiyalarını aradan qaldıra bilər. Tərkibi, konsentrasiyası, həllolma qabiliyyəti və çatdırılma substratı gümüşün antimikrob effektivliyinə təsir göstərə bilər. Son illərdə gümüş emalı texnologiyasındakı irəliləyişlər bu sarğıları daha təsirli etmişdir9,23. Gümüş sarğı texnologiyası inkişaf etdikcə, bu sarğıların yara infeksiyasının nəzarətdə saxlanılmasında effektivliyini və daha da əhəmiyyətlisi, bu güclü gümüş formalarının yara mühitinə və sağalmasına təsirini anlamaq vacibdir.
Bu tədqiqatda, iki qabaqcıl gümüş sarğısının effektivliyini fərqli in vitro və in vivo modellərindən istifadə edərək biofilmlərə qarşı Ag1+ ionları istehsal edən ənənəvi gümüş sarğılarla müqayisə etdik. Həmçinin, bu sarğıların yara mühitinə və infeksiyadan asılı olmayan sağalmaya təsirini qiymətləndirdik. Çatdırılma matrisinin təsirini minimuma endirmək üçün sınaqdan keçirilmiş bütün gümüş sarğılar karboksimetilsellülozadan ibarət idi.
Bu gümüş sarğıların Pseudomonas aeruginosa və Staphylococcus aureus-un kolonial biofilmlərinə qarşı ilkin qiymətləndirməmiz göstərir ki, ənənəvi Ag1+ sarğılarından fərqli olaraq, iki qabaqcıl gümüş sarğı, Ag1+ + EDTA/BC və oksigenləşdirilmiş Ag duzları 5-də təsirli olur. Bir neçə gün ərzində biofilm bakteriyalarını effektiv şəkildə öldürür. Bundan əlavə, bu sarğılar plankton bakteriyalarına təkrar məruz qaldıqda biofilmin yenidən əmələ gəlməsinin qarşısını alır. Ag1+ sarğısı Ag1+ + EDTA/BC ilə eyni gümüş birləşmə və əsas matrisi olan gümüş xlorid ehtiva edirdi və eyni müddət ərzində biofilm daxilində bakteriyaların canlılığına məhdud təsir göstərirdi. Ag1+ + EDTA/BC sarğısının eyni matris və gümüş birləşməsindən ibarət Ag1+ sarğısından biofilmə qarşı daha təsirli olduğu müşahidəsi, başqa yerdə bildirildiyi kimi, gümüş xloridin biofilmə qarşı təsirini artırmaq üçün əlavə maddələrin tələb olunduğu fikrini dəstəkləyir15. Bu nəticələr, BC və EDTA-nın ümumi sarğı effektivliyinə əlavə töhfə verdiyini və Ag1+ sarğılarında bu komponentin olmamasının in vitro effektivliyin nümayiş etdirilməməsinə səbəb ola biləcəyi fikrini dəstəkləyir. Ag2+ və Ag3+ ionları istehsal edən oksigenləşdirilmiş Ag duz sarğılarının Ag1+-dən daha güclü antibakterial təsir göstərdiyini və Ag1+ + EDTA/BC-yə bənzər səviyyələrdə olduğunu aşkar etdik. Lakin, yüksək redoks potensialına görə, Ag3+ ionlarının yara biofilmlərinə qarşı nə qədər aktiv və təsirli qaldığı məlum deyil və buna görə də əlavə tədqiqatlara ehtiyac duyur. Bundan əlavə, bu tədqiqatda sınaqdan keçirilməmiş Ag1+ ionları yaradan bir çox fərqli sarğı mövcuddur. Bu sarğılar Ag1+ ionlarının çatdırılmasına və onların biofilmlərə qarşı effektivliyinə təsir göstərə biləcək müxtəlif gümüş birləşmələrindən, konsentrasiyalarından və əsas matrislərdən ibarətdir. Həmçinin qeyd etmək lazımdır ki, yara sarğılarının biofilmlərə qarşı effektivliyini qiymətləndirmək üçün istifadə edilən bir çox fərqli in vitro və in vivo modellər mövcuddur. İstifadə olunan modelin növü, eləcə də bu modellərdə istifadə olunan mühitin duz və protein tərkibi sarğının effektivliyinə təsir edəcəkdir. İn vivo modelimizdə biofilmin in vitro yetkinləşməsinə icazə verdik və sonra onu yaranın dermal səthinə köçürdük. Sahib siçan immun reaksiyası yaraya tətbiq olunan plankton bakteriyalarına qarşı nisbətən təsirlidir və bununla da yara sağaldıqca biofilm əmələ gətirir. Yaraya yetkin biofilmin əlavə edilməsi, yetkin biofilmin sağalmağa başlamazdan əvvəl yarada özünü yerləşdirməsinə imkan verərək, biofilmin əmələ gəlməsinə qarşı sahib immun reaksiyasının effektivliyini məhdudlaşdırır. Beləliklə, modelimiz yaralar sağalmağa başlamazdan əvvəl yetkin biofilmlər üzərində antimikrob sarğıların effektivliyini qiymətləndirməyə imkan verir.
Həmçinin, sarğı uyğunluğunun in vitro şəraitində yetişdirilən biofilmlər və donuz dərisi üzərində gümüş sarğıların effektivliyinə təsir etdiyini aşkar etdik. Yara ilə yaxın təmas sarğının antimikrob effektivliyi üçün vacib hesab olunur24,25. Oksigenlə zənginləşdirilmiş Ag duzları olan sarğılar yetkin biofilmlərlə sıx təmasda idi və bu da 24 saatdan sonra biofilmdəki canlı bakteriyaların sayının əhəmiyyətli dərəcədə azalmasına səbəb oldu. Bunun əksinə olaraq, Ag1+ və Ag1+ + EDTA/BC sarğıları ilə müalicə edildikdə, xeyli sayda canlı bakteriyalar qaldı. Bu sarğılarda sarğının bütün uzunluğu boyunca tikişlər var ki, bu da biofilmlə sıx təmasın qarşısını alan ölü boşluqlar yaradır. In vitro tədqiqatlarımızda bu təmasda olmayan sahələr biofilmdəki canlı bakteriyaların öldürülməsinin qarşısını aldı. Bakteriyaların canlılığını yalnız 24 saatlıq müalicədən sonra qiymətləndirdik; Zamanla sarğı daha doymuş olduqca, bu canlı bakteriyalar üçün sahə azalaraq daha az ölü boşluq ola bilər. Lakin bu, sarğıdakı gümüşün növünün deyil, sarğı tərkibinin vacibliyini vurğulayır.
İn vitro tədqiqatlar müxtəlif gümüş texnologiyalarının effektivliyini müqayisə etmək üçün faydalı olsa da, bu sarğıların in vivo biofilmlərə təsirini anlamaq da vacibdir, burada ev sahibi toxuması və immun reaksiyaları sarğıların biofilmlərə qarşı effektivliyinə töhfə verir. Bu sarğıların yara biofilmlərinə təsiri skanlama elektron mikroskopiyası və hüceyrədaxili və hüceyrəxarici DNT boyalarından istifadə edərək biofilmin EPS boyanması ilə müşahidə edilmişdir. Müəyyən etdik ki, 3 günlük müalicədən sonra bütün sarğılar biofilmlə yoluxmuş yaralarda hüceyrəsiz DNT-ni azaltmaqda təsirli olmuşdur, lakin Ag1+ sarğısı Staphylococcus aureus ilə yoluxmuş yaralarda daha az təsirli olmuşdur. Skanlama elektron mikroskopiyası həmçinin göstərdi ki, gümüş sarğılarla müalicə olunmuş yaralarda xeyli az bakteriya mövcuddur, baxmayaraq ki, bu, Ag1+ sarğısı ilə müqayisədə oksigenləşdirilmiş Ag duz sarğısı və Ag1+ + EDTA/BC sarğısı ilə daha çox nəzərə çarpırdı. Bu məlumatlar göstərir ki, sınaqdan keçirilmiş gümüş sarğılar biofilmin strukturuna müxtəlif dərəcədə təsir göstərib, lakin gümüş sarğıların heç biri biofilmi məhv edə bilməyib və bu da yara biofilm infeksiyalarının müalicəsinə vahid yanaşmaya ehtiyac olduğunu təsdiqləyir; gümüş qolbaqlardan istifadə. Müalicədən əvvəl biofilmin çox hissəsinin çıxarılması üçün fiziki təmizlənmə aparılır.
Xroniki yaralar tez-tez ağır iltihab vəziyyətində olur, artıq iltihab hüceyrələri yara toxumasında uzun müddət qalır, toxuma zədələnməsinə səbəb olur və yarada səmərəli hüceyrə metabolizması və funksiyası üçün lazım olan oksigeni tükəndirir26. Biofilmlər hüceyrə proliferasiyasının və miqrasiyasının inhibə edilməsi və iltihab əleyhinə sitokinlərin aktivləşməsi də daxil olmaqla müxtəlif yollarla sağalmaya mənfi təsir göstərərək bu düşmən yara mühitini daha da ağırlaşdırır27. Gümüş sarğılar daha təsirli olduqca, onların yara mühitinə və sağalmasına təsirini anlamaq vacibdir.
Maraqlıdır ki, bütün gümüş sarğılar biofilmin tərkibinə təsir etsə də, yalnız oksigenləşdirilmiş gümüş duz sarğıları bu yoluxmuş yaraların yenidən epitelizasiyasını artırmışdır. Bu məlumatlar əvvəlki tapıntılarımızı17 və Kalan və digərlərinin (2017)28 tapıntılarını dəstəkləyir, çünki gümüşün aşağı konsentrasiyaları biofilmlərə qarşı təsirli idi, oksigenləşdirilmiş gümüş duzlarının yaxşı təhlükəsizlik və toksiklik profillərini nümayiş etdirdi.
Hazırkı tədqiqatımız antimikrob gümüş sarğıları arasındakı gümüş texnologiyasındakı fərqləri və bu texnologiyanın yara mühitinə və infeksiyadan asılı olmayan sağalmaya təsirini vurğulayır. Lakin, bu nəticələr Ag1+ + EDTA/BC sarğısının zədələnmiş dovşan qulaqlarının in vivo sağalma parametrlərini yaxşılaşdırdığını göstərən əvvəlki tədqiqatlardan fərqlənir. Lakin bu, heyvan modellərində, ölçmə müddətlərində və bakterial tətbiq metodlarında fərqlərlə bağlı ola bilər29. Bu halda, sarğının aktiv maddələrinin biofilmə daha uzun müddət təsir göstərməsi üçün yara ölçmələri zədədən 12 gün sonra aparılmışdır. Bu, Ag1+ + EDTA/BC ilə müalicə olunan klinik olaraq yoluxmuş ayaq xoralarının əvvəlcə bir həftəlik müalicədən sonra, daha sonra isə Ag1+ + EDTA/BC ilə müalicənin növbəti 3 həftəsində və antimikrob olmayan dərmanların istifadəsindən sonra 4 həftə ərzində ölçüsünün artdığını göstərən bir tədqiqatla dəstəklənir. Xoraların ölçüsünü azaltmaq üçün CMC sarğıları30.
Gümüşün müəyyən formalarının və konsentrasiyalarının əvvəllər in vitro 11-də sitotoksik olduğu göstərilmişdir, lakin bu in vitro nəticələr həmişə in vivo mənfi təsirlərə çevrilmir. Bundan əlavə, gümüş texnologiyasındakı irəliləyişlər və sarğılardakı gümüş birləşmələrinin və konsentrasiyalarının daha yaxşı başa düşülməsi bir çox təhlükəsiz və effektiv gümüş sarğılarının inkişafına səbəb olmuşdur. Lakin, gümüş sarğı texnologiyası inkişaf etdikcə, bu sarğıların yara mühitinə təsirini anlamaq vacibdir31,32,33. Əvvəllər bildirilmişdi ki, təkrar epitelizasiya sürətinin artması iltihab əleyhinə M2 makrofaqlarının pro-iltihab M1 fenotipi ilə müqayisədə artmasına uyğundur. Bu, gümüş hidrogel yara sarğılarının gümüş sulfadiazin və antimikrob olmayan hidrogellərlə müqayisə edildiyi əvvəlki siçan modelində qeyd edilmişdir34.
Xroniki yaralarda həddindən artıq iltihab ola bilər və artıq neytrofillərin mövcudluğunun yaraların sağalmasına mənfi təsir göstərə biləcəyi müşahidə edilmişdir35. Neytrofil çatışmazlığı olan siçanlarda aparılan bir araşdırmada, neytrofillərin olması reepitelializasiyanı gecikdirmişdir. Artıq neytrofillərin olması xroniki və yavaş sağalan yaralarla əlaqəli olan yüksək səviyyədə proteazlara və superoksid və hidrogen peroksid kimi reaktiv oksigen növlərinə səbəb olur37,38. Eynilə, makrofaq sayının artması, nəzarətsiz qaldıqda, yaranın sağalmasının gecikməsinə səbəb ola bilər39. Bu artım, makrofaqların iltihabı dəstəkləyən fenotipdən sağalan fenotipə keçə bilməməsi və yaraların sağalmanın iltihabi mərhələsindən çıxa bilməməsi halında xüsusilə vacibdir40. Bütün gümüş sarğılarla 3 günlük müalicədən sonra biofilmlə yoluxmuş yaralarda neytrofillərin və makrofaqların azalmasını müşahidə etdik, lakin azalma oksigenli duz sarğıları ilə daha çox nəzərə çarpırdı. Bu azalma gümüşə qarşı immun reaksiyasının, azalmış bioyükə reaksiyanın və ya yaranın sonrakı sağalma mərhələsində olması və buna görə də yaradakı immun hüceyrələrinin azalmasının birbaşa nəticəsi ola bilər. Yaradakı iltihabi hüceyrələrin sayının azaldılması yaranın sağalması üçün əlverişli bir mühit saxlaya bilər. Ag oksisaltlarının infeksiyadan asılı olmayan sağalmanı necə təşviq etdiyinin təsir mexanizmi bəlli deyil, lakin Ag oksisaltlarının oksigen istehsal etmək və iltihabın vasitəçisi olan hidrogen peroksidin zərərli səviyyələrini məhv etmək qabiliyyəti bunu izah edə bilər və əlavə tədqiqat tələb edir17.
Xroniki sağalmayan yoluxmuş yaralar həm həkimlər, həm də xəstələr üçün problem yaradır. Bir çox sarğıların antimikrob təsirli olduğunu iddia etsə də, tədqiqatlar nadir hallarda yara mikro mühitinə təsir edən digər əsas amillərə diqqət yetirir. Bu tədqiqat göstərir ki, müxtəlif gümüş texnologiyaları fərqli antimikrob təsirə malikdir və ən əsası, infeksiyadan asılı olmayaraq yara mühitinə və sağalmasına fərqli təsir göstərir. Bu in vitro və in vivo tədqiqatlar bu sarğıların yara infeksiyalarının müalicəsində və sağalmasını təşviq etməkdə effektivliyini göstərsə də, klinikada bu sarğıların effektivliyini qiymətləndirmək üçün təsadüfi nəzarətli sınaqlara ehtiyac var.
Cari tədqiqat zamanı istifadə edilən və/və ya təhlil edilən məlumat dəstləri müvafiq müəllifdən ağlabatan tələb olduqda əldə edilə bilər.
Yazı vaxtı: 15 iyul 2024